细胞生物学Cell Biology
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各类western转膜条件
丁香園上一篇好文章！
除了抗體原因，轉膜恐怕是western blot成敗的最關鍵因素。
蛋白來源：RAW264.7 總蛋白
蛋白名稱（可保密）：一些轉錄因子
蛋白分子量：40~70 KD
WB用膜類型、孔徑：0.45 NC
轉膜方式（恒壓、恒流）：濕轉 恒流400 mA
轉膜時間：60~90 min
PS.其實吧，以我的經驗來看，除非目的蛋白特別小，或者特別大，不然轉膜時間真的不是那么重要， 曾經因為失誤，轉了15 min就拆下來了，但從麗春紅染色來看，跟平常實驗也沒有太大的區別。
蛋白來源：內皮細胞 總蛋白
蛋白名稱（可保密）：occludin & AKT
蛋白分子量：65 KD & 56 KD
WB用膜類型、孔徑：0.45 PVDF
轉膜方式（恒壓、恒流）：濕轉 恒壓 100 V
轉膜時間：60~70 min
設備名字是“Bio-Rad mini”。
蛋白來源：乳鼠心肌細胞和成年鼠心肌組織 總蛋白和核蛋白
蛋白名稱（可保密）：保密
蛋白分子量：65 KD & 55 KD
WB用膜類型、孔徑：PVDF（預先用甲醇處理）
轉膜方式（恒壓、恒流）：半干轉 恒壓 12 V
轉膜時間：30-40 min
設備：“Bio-Rad mini”
建議：最開始做過濕轉（過夜的那種），太費事費時，效果也不如半干轉。
蛋白來源：293T細胞
蛋白名稱（可保密）：
蛋白分子量：95 KD & 35 KD
WB用膜類型、孔徑：PVDF
轉膜方式（恒壓、恒流）：濕轉 恒壓 90 V-110 V，控制電流不要超過300 mA。
轉膜時間：70 min
蛋白來源：腫瘤手術標本
蛋白名稱（可保密）：轉錄因子
蛋白分子量：33 KDa
WB用膜類型、孔徑：PVDF膜
轉膜方式（恒壓、恒流）：350 mA 恒流
轉膜時間：150 min
轉膜設備：濕轉 Bio-Rad
說明：相同條件曾用于數個30-70 KDa的蛋白，都能成功轉上，不過沒有試縮短時間效果如何； 實驗時沒為轉膜條件苦惱，倒是電泳時膠的濃度及時間根據不同分子量而有區別。
蛋白來源：成纖維細胞
蛋白名稱（可保密）：smad3
蛋白分子量：54 KDa
WB用膜類型、孔徑：PVDF膜
轉膜方式（恒壓、恒流）：350 mA 恒流
轉膜時間：150 min
轉膜設備：濕轉 Bio-Rad
蛋白來源：胰腺癌細胞
蛋白名稱（可保密）：
蛋白分子量：16 KDa and 42 KDa
WB用膜類型、孔徑：PVDF膜
轉膜方式（恒壓、恒流）：120 V 恒壓
轉膜時間：90 min
轉膜設備：濕轉 Bio-Rad
蛋白來源：大鼠血管平滑肌細胞
蛋白名稱（可保密）：保密
蛋白分子量：72 KD，42 KD 和22 KD
WB用膜類型、孔徑：一般的PVDF膜
轉膜方式（恒壓、恒流）：濕轉，恒流一張膜0.26 A，兩張膜0.3 A。
轉膜時間：90 min
轉膜時間：90 min
設備：“Bio-Rad mini”
建議：轉膜緩沖液最多用3次，最好現用現配，我們用的沒有加SDS，轉的時候最好能用冰塊一類的東西降一下溫，這樣轉的效果要好一些，轉的時候一定要把三明治每層之間的氣泡除去，同時使濾紙大于膜，膜大于膠，以免燒壞電極。
蛋白來源：大鼠PBMC
蛋白名稱（可保密）：保密
蛋白分子量：55 KD
WB用膜類型、孔徑：0.22的PVDF膜
轉膜方式（恒流）：濕轉
轉膜時間：60-90 min
轉膜時間：60-90 min
設備：“Bio-Rad mini”
建議：轉膜液用過兩三次之后轉膜效果就很差了 其它按照常規就好了 其實0.22的膜一般不怕轉過頭 以我們的經驗，轉膜時間、電壓其實 也有很大范圍的調整 ，并不是非要固定于哪一個最合適，曾經做過 一張膜轉，17 KD的和170 KD的，按照170 KD的條件，17 KD的轉膜也很好的。
蛋白來源：人非小細胞肺癌細胞系
蛋白名稱（可保密）：保密
蛋白分子量：大于250 kD
WB用膜類型、孔徑：millipore PVDF膜 0.45 um
轉膜方式（恒壓、恒流）：濕轉，恒流0.3A。
轉膜時間：180min
轉膜時間：180min
設備：“Bio-Rad ”
建議：電轉保持電壓在70 V以上，保持低溫，如果電壓低過70就需要換緩沖液了。
蛋白來源：白血病細胞
蛋白名稱（可保密）：保密
蛋白分子量：28 KD
WB用膜類型、孔徑：0.45的NC膜
轉膜方式（恒流）：濕轉，90 min，0.25 A
設備：“Bio-Rad ”
建議：海綿厚度要合適，一次轉磨用的海綿太薄，導致三明治沒夾緊，轉膜后拿出來一看，marker都變得七扭八歪。但是有前輩說墊的海綿太厚可能將膠壓斷，沒經歷過，不知道是不是會有這種情況。
蛋白來源：腫瘤細胞
蛋白名稱（可保密）：磷酸化蛋白
蛋白分子量：10-200 KDa
WB用膜類型、孔徑：millipore PVDF膜 0.45 um
轉膜方式（恒壓、恒流）：120 v 恒壓
轉膜時間：120 min
轉膜設備：濕轉 Bio-Rad
建議：轉膜緩沖液只用2次，基本都轉上，5%BSA封閉，減少背景。
蛋白來源：胰腺β細胞
蛋白名稱（可保密）：******
蛋白分子量：90-130 KDa
WB用膜類型、孔徑：PVDF膜
轉膜方式（恒壓、恒流）：250 mA 恒流
轉膜時間：150 min
轉膜設備：濕轉
蛋白來源：原核表達
蛋白名稱（可保密）：保密
蛋白分子量：38 KD
WB用膜類型、孔徑：0.45 NC
轉膜方式（恒壓、恒流）：濕轉 恒壓：100 V
轉膜時間：120 min
蛋白來源：心臟
蛋白名稱（可保密）：
蛋白分子量：220 kDa，130 kDa，70 kDa，41kDa
WB用膜類型、孔徑：PVDF
轉膜方式（恒壓、恒流）：恒壓
轉膜時間：70 v120 min，180 min，5-6 h
轉膜設備：伯樂濕轉
建議改進方向（可選）：40 kDa一下，70 v ，60-90 min足夠，40-70 kDa 90-120 min即可。
70-120 kDa ，70 v，120-180 min足夠，120-180 kDa ，180-240 min，180 kDa以上建議6 h。
蛋白來源：卵巢癌細胞膜蛋白
蛋白名稱（可保密）：
蛋白分子量：53 KD
WB用膜類型、孔徑：PVDF膜 0.45 um
轉膜方式（恒壓、恒流）：恒壓
轉膜時間：80 V 100 min
轉膜設備：濕轉 Bio-Rad
蛋白來源：人宮頸癌HELA細胞總蛋白
蛋白名稱（可保密）：β-actin
蛋白分子量：42
WB用膜類型、孔徑：PVDF膜 0.45 um
轉膜方式（恒壓、恒流）：恒壓
轉膜時間：50 4 h
轉膜設備：濕轉 Bio-Rad
蛋白來源：腦組織
蛋白名稱（可保密）：
蛋白分子量：16 KD、27 KD、32 KD、42 KD
WB用膜類型、孔徑：PVDF 0.22 um
轉膜方式（恒壓、恒流）：半干轉 恒流 1 mA/cm2或2 mA/cm2
轉膜時間：不定
轉膜設備：北京六一儀器
建議：我共做了六個蛋白，所以總在想節約時間的方式。
在預試時我會觀察電壓數與轉膜效率的關系，所以我不會按時間來定何時轉完，而是按電壓來定。通過染膠來確定電壓數與轉移蛋白分子量上限的關系。這樣有的5分鐘就轉完了，不用多浪費時間。并且六一的半干轉膜儀隨著使用次數的增多，效率也會下降，所以時間和轉膜效率（尤其是使用后期）的關系并不穩定，單純依靠時間有時會有問題。
蛋白來源：CHO cell
蛋白名稱（可保密）：酶原
蛋白分子量：40 KD
WB用膜類型、孔徑：0.22的PVDF膜（Biorad）
轉膜方式（恒壓）：100 V，濕轉，轉膜時間：60 min。
設備：Tanon（上海天能）
建議：
1. 轉膜液現用現配，用完倒掉。
2. 轉膜時間，電壓可以適當調整。分子量大或者小一些的蛋白，采用此條件一樣轉膜效率很高。
蛋白來源：Hepg2
蛋白名稱（可保密）：EGFR
蛋白分子量：170kd
WB用膜類型、孔徑：pvdf 0.45
轉膜方式（恒壓、恒流）：24V
轉膜時間：2個半小時
轉膜設備：伯樂半干轉
蛋白來源：肝癌細胞
蛋白名稱：HIF-1α
蛋白分子量：120 kD
WB用膜類型、孔徑：NC膜
轉膜方式（恒壓）：80伏，濕轉
轉膜時間：150分鐘
轉膜時間：150分鐘
設備：“Bio-Rad mini”
建議：濕轉，轉膜液特別重要，否則會導致電壓或者電流不穩影響轉膜條帶。轉膜均現配先用，不重復利用。轉膜時間一般是150分鐘，80伏恒壓。經李春紅染色，靠近蛋白膠的一側膜上蛋白染色深，膜另外一面染色淺，說明蛋白未轉過。該濕轉條件自己做過的蛋白分子量范圍：170-36 kD。
蛋白來源：心肌細胞總和膜
蛋白名稱（可保密）：
蛋白分子量：128 KD，100，60，55，43 KD
WB用膜類型、孔徑：NC膜 0.2 um
轉膜方式（恒壓、恒流）：恒壓
轉膜時間：70 V 200 min
轉膜設備：濕轉 Bio-Rad
建議：轉膜液最好現配現現用，或配成母液，最好不重復使用，70 V電壓下，電流約154 mA。甲醇可以加到150 ml。對大分子量如200 KD轉膜時間延長6-8 h。
蛋白來源：肺臟
蛋白名稱（可保密）：ICAM-1
蛋白分子量：85~110 KD
WB用膜類型、孔徑：0.22NC
轉膜方式（恒壓、恒流）：濕轉 恒流 300 mA
轉膜時間：120 min
設備名字 Bio-Rad mini
一抗用的santa cruz 1 mL包裝的。 比例調整到1：800做出很好的條帶。 效價會一直降低的。去年做的這個指標，今年夏天做就不行了。
蛋白來源：成纖維細胞
蛋白名稱（可保密）：
蛋白分子量：16 KDa
WB用膜類型、孔徑：0.2 um PVDF膜
轉膜方式（恒壓、恒流）：0.2 A恒流
轉膜時間：65 min
轉膜設備：濕轉 Bio-Rad
蛋白來源：成纖維細胞
蛋白名稱（可保密）：
蛋白分子量：28 KDa
WB用膜類型、孔徑：0.2 umPVDF膜
轉膜方式（恒壓、恒流）：0.25 A恒流
轉膜時間：60 min
轉膜設備：濕轉 Bio-Rad
蛋白來源：人腫瘤細胞
蛋白名稱（可保密）：保密
蛋白分子量：80 KD
WB用膜類型、孔徑：0.45 um PVDF膜
轉膜方式（恒壓、恒流）：半干轉移系統恒流，勿超過0.85 mA/cm2，同時轉多張膜電流需累加（串聯）
轉膜時間：60-90 min
設備：Bio-Rad
其實有些東西并不是非常嚴格的，要轉移的目的蛋白分子量小，那么轉移的時間就短一些，反之，則長一點；蛋白量充足，可以多轉一會，蛋白量較少，則要少轉一下，免得蛋白穿膜而過到了濾紙上而前功盡棄。
蛋白來源：人和鼠肝癌細胞總蛋白、胞漿、胞核蛋白
蛋白名稱（可保密）：***
蛋白分子量：17--116 kd
WB用膜類型、孔徑：PVDF膜 0.45 um
轉膜方式（恒壓、恒流）：恒流 200 mA
轉膜時間：3 h
轉膜設備：濕轉 北京六一 24D mini
蛋白來源：CO COS7 293T
蛋白名稱（可保密）：保密
蛋白分子量：80 72 56 52 48 25 18KD
WB用膜類型、孔徑：0.45 um PVDF膜
轉膜方式（恒壓、恒流）：濕轉 90 V 電流約為230--280 mA之間。兩張膜串聯疊加。
轉膜時間：40 min
設備：Bio-Rad 法碼西亞
蛋白來源：人腫瘤細胞
蛋白名稱（可保密）：磷酸化蛋白
蛋白分子量：30-60 KDa
WB用膜類型、孔徑：pall NC膜 0.45 um
轉膜方式（恒壓、恒流）：恒流 0.85-1 mA/平方厘米膜
轉膜時間：60-90 min
轉膜設備: 北京六一 半干轉
建議：轉膜緩沖液用新鮮配制的，可先配成2倍的母液，轉膜液的多少會影響電轉的效率，一般將吸水紙潤濕即可，不要和膜一起浸泡，這樣效果很好。
蛋白來源：人肝癌腫瘤細胞
蛋白名稱（可保密）：notch
蛋白分子量：60-120 KDa
WB用膜類型、孔徑：pall NC膜 0.45 um
轉膜方式（恒壓、恒流）：恒流 0.3 A
轉膜時間：-20度冰柜120 min
轉膜設備: 濕轉 Bio-Rad
建議：轉膜緩沖液用新鮮配制的，可先配成10倍或5倍的母液，保持低溫是轉膜效果的一個保證，這樣效果很好。
蛋白來源：膠質瘤細胞總蛋白和核蛋白
蛋白名稱（可保密）：
蛋白分子量：18 KDa 、36 KDa、55 KDa、98 KDa
WB用膜類型、孔徑：NC膜 PALL
轉膜方式（恒壓、恒流）：0.35 恒流
轉膜時間：60 min
轉膜設備：濕轉 Bio-Rad mini
轉緩液的配制有點講究。如果蛋白大于一百多，一般加入SDS，時間延長結果會更好些。
由于，目前試驗的蛋白就都不大，所以，我們都采用不加SDS的轉緩液，跑出來的條帶也很整齊、干凈。
蛋白來源大腸癌205
蛋白名稱（可保密）：保密
蛋白分子量：92 kd，43 kd
WB用膜類型、孔徑：0.45pvdf
轉膜方式（恒壓、恒流）：恒壓
轉膜時間：90 min
轉膜設備：濕轉，天能。
蛋白來源：大鼠腦組織
蛋白名稱（可保密）：BDNF（28 KDa）、Bactin（42 KDa）、LaminB（72 KDa），以及磷酸化蛋白（保密 43 KDa）
WB用膜類型、孔徑：PVDF（0.45）膜
轉膜方式（恒壓、恒流）：300 mA 恒流
轉膜時間：60 min
轉膜設備：濕轉 Bio-Rad Mini
轉膜緩沖液：25％甲醛 覺得這個濃度的甲醛可以有效降低電轉的熱量，而且使膜對蛋白的吸附效果較好，Marker轉到膜上很鮮艷。 用立春紅染色效果也很好。
蛋白來源：表達產物
蛋白名稱（可保密）：
蛋白分子量：29 KDa
WB用膜類型、孔徑：PVDF
轉膜方式（恒壓、恒流）：0.3 A 恒流
轉膜時間：80 min
轉膜設備: 濕轉 Bio-Rad
蛋白來源：cell lysate, culture medium
蛋白名稱（可保密）：
蛋白分子量：15-50 kD
WB用膜類型、孔徑：NC，PVDF， 0.45 um
轉膜方式（恒壓、恒流）：恒壓， semi-dry
轉膜時間：about 2h is ok if the protein is small and the voltage can keep 100 V， if not increase to 3-4 h。
轉膜設備： Bio-Rad
蛋白來源：肺臟、肝臟等。
蛋白名稱（可保密）：actin
蛋白分子量：43 kD
WB用膜類型、孔徑：NC膜PALL 0.22 um
轉膜方式（恒壓、恒流）：濕轉 恒流 200 mA
轉膜時間：45~60 min
設備名字 Bio-Rad mini
用的santa cruz 分裝和整裝的都可以。效價一般1：1000-1：3000左右，可穩定較長一段時間。
蛋白來源肺臟
蛋白名稱（可保密）：保密
蛋白分子量：19 kd,35 kd
WB用膜類型、孔徑：0.2pvdf
轉膜方式（恒壓、恒流）：恒流250
轉膜時間：150 min
轉膜設備：濕轉 Bio-Rad mini
蛋白來源：大鼠血管
蛋白名稱（可保密）：保密
蛋白分子量：140 kd
WB用膜類型、孔徑：0.45pvdf
轉膜方式（恒壓、恒流）：恒流，200 mA
轉膜時間：210 min
轉膜設備:濕轉,北京六一
蛋白來源：心肌
蛋白名稱（可保密）：
蛋白分子量：90 kDa，70 kDa,12.6 kDa
WB用膜類型、孔徑：NC
轉膜方式（恒壓、恒流）：恒壓
轉膜時間：70 v 240 min，120 min，60 min
轉膜設備：伯樂濕轉
蛋白來源：腦
蛋白名稱（可保密）：保密
蛋白分子量：16 KD 60 KD
WB用膜類型、孔徑：16的用0.22的PVDF，60的用0.45的NC
轉膜方式（恒壓、恒流）：20 V
轉膜時間：16的30 min，60的90 min
轉膜設備：Bio-Rad 半干
蛋白來源：子宮內膜癌組織
蛋白名稱（可保密）：
蛋白分子量：156.8
WB用膜類型、孔徑：NC膜
轉膜方式（恒壓、恒流）：恒流400mA
轉膜時間：90 min
轉膜設備：濕轉 Bio-Rad
蛋白來源：真核表達
蛋白名稱（可保密）：（多種，30個以上）
蛋白分子量：40-200 kD
WB用膜類型、孔徑：PVDF
轉膜方式（恒壓、恒流）：恒壓100 V（電流在280 mA至350 mA之間）
轉膜時間：60 min（M<100kD）,60-100min (100kD<M<200kD)
轉膜設備：濕轉
蛋白來源：大鼠腎臟
蛋白名稱（可保密）：保密
蛋白分子量：130 kD
WB用膜類型、孔徑：0.45NC膜 PALL
轉膜方式（恒壓、恒流）：濕轉 恒流 350 mA
轉膜時間：120min
轉膜時間：120min
設備名字 Bio-Rad mini
一抗用的sigma 羊抗大鼠，0.2 mL包裝的，打折后價格3000多，有些貴哦。
比例調整到1：1500左右條帶可，用BSA封閉。但是背景稍高。
蛋白來源：腦組織
蛋白名稱（可保密）：
蛋白分子量：38 KDa
WB用膜類型、孔徑：PVDF膜，
轉膜方式（恒壓、恒流）：80 v恒壓
轉膜時間：180 min
轉膜設備：濕轉 Bio-Rad mini
蛋白來源：真核表達
蛋白名稱（可保密）：
蛋白分子量：約35 kD（雙亞基）
WB用膜類型、孔徑：0.22 um PVDF
轉膜方式（恒壓、恒流）：恒流200 mA
轉膜時間：60 min
轉膜設備：濕轉Bio-rad,天能，六一
轉膜時間其實不需要那么長的，轉膜沒轉上一般原因不在這里，可能是轉膜液的原因：有些蛋白SDS可能影響其與膜的結合，還原型電泳因巰基乙醇的原因也可能導致后面的抗體不結合（這是我最近的經驗教訓），還有一抗的選擇很重要，一定要選識別線性表位的抗體，才能用于做WB。
蛋白來源：細菌蛋白
蛋白名稱（可保密）：全部的可溶性蛋白
蛋白分子量：11-170 KD
WB用膜類型、孔徑：0.45 NC
轉膜方式（恒壓、恒流）：濕轉 恒流300 mA
轉膜時間：80 min
蛋白來源： 骨肉瘤細胞
蛋白名稱（可保密）：
蛋白分子量： 72 kDa
WB用膜類型、孔徑： PVDF膜(0.45 um)
轉膜方式（恒壓、恒流）： 半干轉 恒流200 mA
轉膜時間： 20-30 min
轉膜設備：Bio-Rad 型號忘了，就是有4個插孔的電泳儀。
建議改進方向：低溫很重要，新鮮的電轉液也很重要。
蛋白來源：骨肉瘤CELL LINE
蛋白名稱（可保密）：Beta actin
蛋白分子量：42 kDa
WB用膜類型、孔徑：Nitrocellulose Membrane 0.2 um Pore Size (Invitrogen)
轉膜方式（恒壓、恒流）：濕轉，恒壓22 v
轉膜時間：90 min
轉膜設備：X-cell Sure Lock Mini-cell (Invitrogen)
建議改進方向：轉膜過程冰水浴，保持低溫，Transfer Buffer重復使用。
蛋白來源：腎瘤細胞
蛋白分子量：39 kDa
WB用膜類型、孔徑：Nitrocellulose Membrane 0.2 um Pore Size (Invitrogen)
轉膜方式（恒壓、恒流）：濕轉 恒壓100 v
轉膜時間：50 min
蛋白來源：MCF7
蛋白名稱（可保密）：
蛋白分子量：70 kDa
WB用膜類型、孔徑：PVDF膜（GE）
轉膜方式（恒壓、恒流）：濕轉 100伏
轉膜時間：60 min
轉膜設備：伯樂小轉膜儀
蛋白來源：pichia 分泌表達
蛋白名稱（可保密）：細胞因子等
蛋白分子量：17到30 kDa
WB用膜類型、孔徑：millipore PVDF 0.45 um
轉膜方式（恒壓、恒流）：濕轉 恒壓：100 V
轉膜時間：60 min
這個條件除了100 KDa的預染maker轉的不好，剩下的條帶都非常清晰。正向前面ycwzq說的，感覺時間不是很重要，只要蛋白別太小或太大，在一個比較寬的時間和電壓范圍都能轉上。當然這些還有一個重要的影響因素就是所用的蛋白轉印緩沖液。
所以建議把自己用的轉印緩沖液的配方也貼上，便于分析交流。
我先說我的吧，是大師兄師姐的配方，我用了感覺還不錯，但是100 KDa以上的轉的不好。
蛋白轉印緩沖液pH8.2:Tris堿1.93 g，甘氨酸9 g，甲醇200 ml，加水定容至1000 ml。
蛋白來源： 大鼠坐骨神經
蛋白名稱（可保密）：
蛋白分子量： 30 kDa
WB用膜類型、孔徑： PVDF膜(0.2 um)
轉膜方式（恒壓、恒流）： 濕轉 恒流300 mA
轉膜時間： 45 min
轉膜設備: Bio-Rad
蛋白來源：小鼠胚胎成纖維
蛋白名稱（可保密）：
蛋白分子量：36 KDa、55 KDa
WB用膜類型、孔徑：PVDF膜 0.45
轉膜方式（恒壓、恒流）：0.3 A 恒流
轉膜時間：60 min
轉膜設備: 濕轉 Bio-Rad mini
墊子變薄時，可用三層纖維墊，也沒問題。
蛋白來源：小鼠前列腺癌細胞
蛋白名稱（可保密）：P53 P21 RAD51 GAPDH
蛋白分子量：53 KDa、21 KDa、37 KDa、36 KDa
WB用膜類型、孔徑：PVDF膜 0.45
轉膜方式（恒壓、恒流）：恒壓110 v
轉膜時間：60 min
轉膜設備: 濕轉 Bio-Rad mini
蛋白來源：HEK293總蛋白
蛋白名稱（可保密）：***
蛋白分子量：~200KD
WB用膜類型、孔徑：PVDF膜 0.2 um (用甲醇預先處理)
轉膜方式（恒壓、恒流）：恒壓 25 V
轉膜時間：過夜 (~16-20 hours)
轉膜設備:biorad mini
蛋白來源：人前列腺癌細胞
蛋白名稱（可保密）：***
蛋白分子量：~40 KD
WB 用膜類型、孔徑：PVDF膜 0.45 um (用甲醇預先處理)
轉膜方式（恒壓、恒流）：恒壓 20 V， 限制最高電流0.3 A。
轉膜時間：過夜 (~16-20hours)
轉膜設備：biorad semi-dry
蛋白來源：組織
蛋白名稱（可保密）
蛋白分子量：42 KDa
WB用膜類型、孔徑：PVDF膜（0.22）
轉膜方式（恒壓、恒流）：350 mA 恒流
轉膜時間：60-90 min
轉膜設備：濕轉 Bio-Rad
蛋白來源：E.Coli BL21
蛋白名稱（可保密）：
蛋白分子量：4 kd
WB用膜類型、孔徑：PVDF 0.22 um
轉膜方式（恒壓、恒流）：恒壓15 v
轉膜時間：O/N
轉膜設備: Bio-Rad Mini 濕轉
轉膜液的配制：for 1 L transfer buffer， 200 ml Methanol，14.4 g Glycine，3.03 g Trizma-base。
用了Trcine-gel SDS Page，效果不錯
蛋白來源：腎臟
蛋白名稱（可保密）：
蛋白分子量：23 kd
WB用膜類型、孔徑：PVDF 0.45 um
轉膜方式（恒壓、恒流）：恒壓20 v
轉膜時間：35 mins
轉膜設備: Bio-Rad 半干
蛋白來源： 來自MDCK增殖的流感病毒裂解物
蛋白名稱（可保密）：PB1
蛋白分子量： 96 kd （注意，10% SDS-PAGE，冰上電泳。用預染marker觀察100kd的條帶跑到膠的正中間位置時，才開始轉膜，否則轉膜效率降低）
WB用膜類型、孔徑： NC膜， 0.45
轉膜方式（恒壓、恒流）：恒壓，100V
轉膜時間： 2 hours
轉膜設備: BIO-rad 轉膜設備。其間，準備一個冰盒，將電泳槽半埋到冰里。
轉膜液的配制：（如甲醇的比例和是否加SDS以及多大質量濃度等）： 2.9 g甘氨酸，5.8 g tris，0.37 g SDS，200 ml甲醇。
蛋白來源：腎臟
蛋白名稱（可保密）：
蛋白分子量：9 kd
WB用膜類型、孔徑：PVDF 0.22 um
轉膜方式（恒壓、恒流）：恒壓20 v
轉膜時間：30 min
轉膜設備: Bio-Rad 半干
蛋白來源： 軟骨細胞
蛋白名稱（可保密）：b-actin
蛋白分子量： 43 kd
WB用膜類型、孔徑： PVDF膜， 0.45
轉膜方式（恒壓、恒流）：濕轉，恒流，350 mA
轉膜時間： 85 min
轉膜設備: BIO-rad 轉膜設備。其間，準備一個冰盒，將電泳槽半埋到冰里。
轉膜液的配制：（2.92 g甘氨酸，5.8 g tris，0.375 g SDS，200 ml甲醇，用雙蒸水定容到1 L）
蛋白來源：宮頸癌細胞
蛋白名稱：保密
蛋白分子量：60 kD
WB用膜類型、孔徑：PVDF膜 0.45 uM
轉膜方式（恒壓、恒流）：恒流，按膜的面積來算電流，標準大小的膜-60 mA/張
（8.2 cm x 6.0 cm)
轉膜時間：2 h
轉膜設備：Biorad semi-dry
轉膜液的配制：Boston Bioproduct Transfer buffer +10-20% 甲醇
建議改進方向：
做半干轉的時候，三明治上面再壓一張濾紙，可以保證壓緊，轉膜效率穩定。用這個條件做過不少不同分子量的蛋白，最小從15 kD，到最大235 kD，都可以得到穩定結果。轉膜液只用一次，不重復使用。
蛋白來源：家牛肝細胞
蛋白名稱（可保密）：保密
蛋白分子量：30 kDa
WB用膜類型、孔徑：NC， 6x8 cm， 0.45 um
轉膜設備：Invitrogen 濕轉，外層冰水浴冷卻。
轉膜方式（恒壓、恒流）：恒流170 mA
轉膜時間：根據膠的厚度而定，每0.5 mm轉30 min， 1.5 mm的超厚預制膠轉1.5-2 h。
轉膜液的配制：10 mM碳酸氫鈉，3 mM碳酸鈉，20%甲醇。
建議改進方向：已考染的膠脫色后可以用此法轉膜，條帶稍淡但不影響結果。
蛋白來源：組織
蛋白名稱（可保密）
蛋白分子量：170 KDa
WB用膜類型、孔徑：PVDF膜（0.45）
轉膜方式（恒壓、恒流）：300 mA 恒流
轉膜時間：170 min
轉膜設備: 濕轉 Bio-Rad
蛋白來源：HepG2細胞
蛋白名稱（可保密）：Akt及P-Akt
蛋白分子量：55KDa/56KD
WB用膜類型、孔徑：PVDF膜 0.45孔徑
轉膜方式（恒壓、恒流）：100V 恒壓
轉膜時間：75 min
轉膜設備: 濕轉 Bio-Rad
蛋白來源：大鼠
蛋白名稱（可保密）：Bactin（42 KDa）
WB用膜類型、孔徑：PVDF（0.45）膜
轉膜方式（恒壓、恒流）：濕轉 恒流150 mA
轉膜時間：100 min
轉膜設備: 北京六一
蛋白來源： 大鼠大腦皮質
蛋白名稱（可保密）：b-actin
蛋白分子量： 43 kd
WB用膜類型、孔徑： PVDF膜， 0.45
轉膜方式（恒壓、恒流）：半干轉，恒流，2 mA/cm2
轉膜時間： 8-55 min
轉膜設備: BIO-rad 轉膜設備。
