貨號：GNA-20-400   GNA-25-500    GNA-50-1000

儲存條件：可在4℃保存1年，或在-80℃長期保存，避免反復凍融。

 

產品描述

偶聯anti-GFP納米抗體的瓊脂糖珠子用于免疫沉淀GFP融合蛋白。

產品優勢

l 沒有普通抗體的輕鏈和重鏈；

l 高親和力：解離常數達到pM級別；

l 高載量：10μl的slurry可以結合2-4μg GFP蛋白；

l 較短的孵育時間，結合5-30min即可；

應用范圍

可用于免疫沉淀（IP）/免疫共沉淀（CoIP）、染色質免疫沉淀（ChIP）/RNA結合蛋白免疫沉淀（RIP）、酶活性測定、質譜分析等；

特異性

可以結合GFP、EGFP、YFP和EYFP等。

產品特性

存儲緩沖液：PBS(含有20%乙醇)。

保存條件：可在4℃保存1年，或在-80℃長期保存，避免反復凍融。

實驗步驟：

收集細胞：

每個免疫沉淀反應大約使用 10^6-10^7 個表達綠色熒光蛋白融合蛋白的細胞，可根據綠色熒光蛋白融合蛋白表達量適當調整細胞數。吸出培養基，向培養皿中加入預冷的1×PBS，漂洗2次，利用細胞刮或胰酶消化收集貼壁細胞，細胞轉移到離心管，500g離心3分鐘并丟棄上清液。

細胞裂解：

1．在裂解緩沖液中加入蛋白酶抑制劑，用500μl預冷的裂解緩沖液重懸細胞。

2．置于冰上30分鐘，可每10分鐘充分吹打一次。
3．4℃，20,000g離心15分鐘，將裂解產物（上清）轉移到一個新的預冷管中，丟棄沉淀。注意：此時細胞裂解產物可長期保存于-80℃。

平衡珠子：

4．振蕩充分混勻GFP-Nanoab-Agarose， 吸取20μl該產品到500 μl預冷的裂解緩沖液中，4℃，2,500g離心2分鐘，丟棄上清液。（此步驟可選）  

結合蛋白

5．將平衡好的GFP-Nanoab-Agarose加入到細胞裂解產物中（如果未做第4步，可在細胞裂解產物中直接加入20μl該產品），于4℃旋轉混合結合5-30min。如果需要，留存50μl的裂解產物進行免疫印跡分析。
6．4℃，2,500g離心2分鐘，丟棄上清液。如果需要，留存50μl上清液進行免疫印跡分析。

清洗珠子：

7．用500μl預冷的裂解緩沖液中重懸6中的GFP-Nanoab-Agarose，4℃，2,500g條件下離心2分鐘，丟棄上清液并重復洗滌2次。

洗脫蛋白：

方法一：
8．加入20μl 2×SDS-sample buffer重懸GFP-Nanoab-Agarose。
95℃，加熱10min，2,500g離心2分鐘收集上清，收集的產物可進行SDS-PAGE及免疫印跡分析。