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貨號:GNA-20-400 GNA-25-500 GNA-50-1000
儲存條件:可在4℃保存1年,或在-80℃長期保存,避免反復凍融。
產品描述
偶聯anti-GFP納米抗體的瓊脂糖珠子用于免疫沉淀GFP融合蛋白。
產品優勢
l 沒有普通抗體的輕鏈和重鏈;
l 高親和力:解離常數達到pM級別;
l 高載量:10μl的slurry可以結合2-4μg GFP蛋白;
l 較短的孵育時間,結合5-30min即可;
應用范圍
可用于免疫沉淀(IP)/免疫共沉淀(CoIP)、染色質免疫沉淀(ChIP)/RNA結合蛋白免疫沉淀(RIP)、酶活性測定、質譜分析等;
特異性
可以結合GFP、EGFP、YFP和EYFP等。
產品特性
存儲緩沖液:PBS(含有20%乙醇)。
保存條件:可在4℃保存1年,或在-80℃長期保存,避免反復凍融。
實驗步驟:
收集細胞:
每個免疫沉淀反應大約使用 10^6-10^7 個表達綠色熒光蛋白融合蛋白的細胞,可根據綠色熒光蛋白融合蛋白表達量適當調整細胞數。吸出培養基,向培養皿中加入預冷的1×PBS,漂洗2次,利用細胞刮或胰酶消化收集貼壁細胞,細胞轉移到離心管,500g離心3分鐘并丟棄上清液。
細胞裂解:
1.在裂解緩沖液中加入蛋白酶抑制劑,用500μl預冷的裂解緩沖液重懸細胞。
2.置于冰上30分鐘,可每10分鐘充分吹打一次。
3.4℃,20,000g離心15分鐘,將裂解產物(上清)轉移到一個新的預冷管中,丟棄沉淀。注意:此時細胞裂解產物可長期保存于-80℃。
平衡珠子:
4.振蕩充分混勻GFP-Nanoab-Agarose, 吸取20μl該產品到500 μl預冷的裂解緩沖液中,4℃,2,500g離心2分鐘,丟棄上清液。(此步驟可選)
結合蛋白
5.將平衡好的GFP-Nanoab-Agarose加入到細胞裂解產物中(如果未做第4步,可在細胞裂解產物中直接加入20μl該產品),于4℃旋轉混合結合5-30min。如果需要,留存50μl的裂解產物進行免疫印跡分析。
6.4℃,2,500g離心2分鐘,丟棄上清液。如果需要,留存50μl上清液進行免疫印跡分析。
清洗珠子:
7.用500μl預冷的裂解緩沖液中重懸6中的GFP-Nanoab-Agarose,4℃,2,500g條件下離心2分鐘,丟棄上清液并重復洗滌2次。
洗脫蛋白:
方法一:
8.加入20μl 2×SDS-sample buffer重懸GFP-Nanoab-Agarose。
95℃,加熱10min,2,500g離心2分鐘收集上清,收集的產物可進行SDS-PAGE及免疫印跡分析。